在生化室日常工作中,大家會發(fā)現(xiàn):在雙試劑測試項目中,總是R2用完了,而R1尚余很多,隨著檢驗次數(shù)的累積,這種效應(yīng)越加明顯,留下來的R1留之無用,棄之可惜。
生化試劑R1、R2消耗量不對等的原因:
如果查閱儀器說明書,可以發(fā)現(xiàn)生化試劑在使用過程中是有損耗的,這種效應(yīng)是由于儀器本身設(shè)計有試劑 ”取樣/ 富余量“所致,多數(shù)儀器都存在這種問題。
儀器在試劑瓶轉(zhuǎn)移到反應(yīng)杯的過程中,會多吸入大概5ul的量,R1、R2同樣的加試劑辦法,到最后會出現(xiàn)什么情況呢?以ALT試劑為例,規(guī)格R1為200ml,R2為50ml,正常情況下儀器參數(shù)設(shè)為:樣品20ul; R1為160ul,R2為40ul,實際吸試劑時,R2每次吸的量是45ul,這樣R2將在1111次測試后用完,而R1在1111*(160+5)次測試后,用量為183ml,富余量為17ml,相同批號試劑累積到5盒時,R1的富余量將是85ml。
解決思路:
在雙試劑測試中,R1 一般為緩沖液, R2為反應(yīng)物質(zhì)混合物。設(shè)想: 兩試劑按二種不同比例混合,其所含反應(yīng)物成分、構(gòu)成比不變,只是反應(yīng)物濃度不同,而反應(yīng)物濃度不同對測定中的反應(yīng)實質(zhì)沒有影響,只對反應(yīng)的有效檢測線性范圍有影響;在樣品量不變的情況下,如果適當增加反應(yīng)物濃度,其線性范圍變寬,濃度減低, 則線性范圍變窄;而如果同時將樣品量也減少一些,則僅是曲線的斜率略降低(靈敏度略降低),而線性范圍幾乎不受影響;對于酶類速率法測定來說,在沒有校準品時, 所提供的K 值有意義,不能輕易改動,而在有校準品時,K 值是可以調(diào)整的。
解決辦法:
如果處于節(jié)約試劑的考慮,如上例ALT項目可采?。篟1 設(shè)定量不變,R2 新設(shè)定量為為36ul。樣品新設(shè)定量= 原設(shè)定量(20ul) *(36/40) = 18ul,用校準品重新定標。
結(jié)果:
R2采用新設(shè)定量36ul,總的測試數(shù)變?yōu)?219次,比原先1111次增加了119次,增加了10%的測試數(shù),即實現(xiàn)了節(jié)省試劑成本10%;理論上,犧牲了很小的檢測靈敏度,實際應(yīng)用中,室間質(zhì)評和室內(nèi)質(zhì)控都沒有影響。
